Mae'r nematod pinwydd yn endoparasit mudol cwarantîn y gwyddys ei fod yn achosi colledion economaidd difrifol mewn ecosystemau coedwigoedd pinwydd. Mae'r astudiaeth bresennol yn adolygu gweithgaredd nematicidal indolau halogenedig yn erbyn nematodau pinwydd a'u mecanwaith gweithredu. Roedd gweithgareddau nematicidal 5-iodoindole ac avermectin (rheolaeth gadarnhaol) yn erbyn nematodau pinwydd yn debyg ac yn uchel ar grynodiadau isel (10 μg/mL). Gostyngodd 5-iodoindole ffrwythlondeb, gweithgaredd atgenhedlu, marwolaethau embryonig a larfa, ac ymddygiad locomotor. Mae rhyngweithiadau moleciwlaidd ligandau â derbynyddion sianel clorid sy'n cael eu rheoli gan glwtamad sy'n benodol i infertebratau yn cefnogi'r syniad bod 5-iodoindole, fel avermectin, yn rhwymo'n dynn i safle gweithredol y derbynnydd. Achosodd 5-iodoindole hefyd amrywiol anffurfiadau ffenoteipig mewn nematodau, gan gynnwys cwymp/crebachu organau annormal a chynnydd mewn gwactod. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai gwactod chwarae rhan mewn marwolaeth a achosir gan fethyleiddio nematodau. Yn bwysig, nid oedd 5-ïodoindol yn wenwynig i'r ddau rywogaeth o blanhigion (bresych a radish). Felly, mae'r astudiaeth hon yn dangos y gall rhoi ïodoindol o dan amodau amgylcheddol reoli anaf i wywo pinwydd.
Mae nematod coed pinwydd (Bursaphelenchus xylophilus) yn perthyn i'r nematodau coed pinwydd (PWN), nematodau endoparasitig mudol y gwyddys eu bod yn achosi difrod ecolegol difrifol i ecosystemau coedwigoedd pinwydd1. Mae clefyd gwywo pinwydd (PWD) a achosir gan y nematod coed pinwydd yn dod yn broblem ddifrifol ar sawl cyfandir, gan gynnwys Asia ac Ewrop, ac yng Ngogledd America, mae'r nematod yn dinistrio rhywogaethau pinwydd a gyflwynwyd1,2. Mae dirywiad coed pinwydd yn broblem economaidd fawr, ac mae'r rhagolygon o'i ledaeniad byd-eang yn peri pryder3. Y rhywogaethau pinwydd canlynol sy'n cael eu hymosod arnynt amlaf gan y nematod: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, a Pinus radiata4. Mae nematod pinwydd yn glefyd difrifol a all ladd coed pinwydd o fewn wythnosau neu fisoedd i gael eu heintio. Yn ogystal, mae achosion o nematodau pinwydd yn gyffredin mewn amrywiaeth o ecosystemau, felly mae cadwyni haint parhaus wedi'u sefydlu1.
Mae Bursaphelenchus xylophilus yn nematod cwarantîn sy'n barasitig i blanhigion ac sy'n perthyn i'r uwchdeulu Aphelenchoidea a'r clade 102.5. Mae'r nematod yn bwydo ar ffyngau ac yn atgenhedlu ym meinweoedd pren coed pinwydd, gan ddatblygu i bedwar cyfnod larfa gwahanol: L1, L2, L3, L4 ac unigolyn sy'n oedolyn1,6. O dan amodau prinder bwyd, mae'r nematod pinwydd yn mynd i gyfnod larfa arbenigol – dauer, sy'n parasiteiddio ei fector – chwilod rhisgl y pinwydd (Monochamus alternatus) ac yn cael ei drosglwyddo i goed pinwydd iach. Mewn gwesteiwyr iach, mae nematodau'n mudo'n gyflym trwy feinweoedd planhigion ac yn bwydo ar gelloedd parenchymaidd, sy'n arwain at nifer o adweithiau gorsensitifrwydd, gwywo pinwydd a marwolaeth o fewn blwyddyn ar ôl haint1,7,8.
Mae rheoli nematodau pinwydd yn fiolegol wedi bod yn her ers tro byd, gyda mesurau cwarantîn yn dyddio'n ôl i'r 20fed ganrif. Mae strategaethau cyfredol ar gyfer rheoli nematodau pinwydd yn cynnwys triniaethau cemegol yn bennaf, gan gynnwys mygdarthu pren a mewnblannu nematoidau i foncyffion coed. Y nematoidau a ddefnyddir amlaf yw avermectin ac avermectin benzoate, sy'n perthyn i'r teulu avermectin. Mae'r cemegau drud hyn yn hynod effeithiol yn erbyn llawer o rywogaethau nematodau ac fe'u hystyrir yn ddiogel i'r amgylchedd9. Fodd bynnag, disgwylir i ddefnyddio'r nematoidau hyn dro ar ôl tro greu pwysau dethol a fydd bron yn sicr o arwain at ymddangosiad nematodau pinwydd gwrthsefyll, fel y dangoswyd ar gyfer sawl plâu pryfed, megis Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella a'r nematodau Trichostrongylus colubriformis ac Ostertagia circumcincta, sydd wedi datblygu ymwrthedd i avermectinau yn raddol10,11,12. Felly, mae angen astudio patrymau ymwrthedd yn rheolaidd a sgrinio nematoidau yn barhaus i ddod o hyd i fesurau amgen, cost-effeithiol a chyfeillgar i'r amgylchedd i reoli PVD. Yn ystod y degawdau diwethaf, mae nifer o awduron wedi cynnig defnyddio darnau planhigion, olewau hanfodol ac anweddolion fel asiantau rheoli nematodau13,14,15,16.
Yn ddiweddar, fe wnaethom ddangos gweithgaredd nematicidal indole, moleciwl signalau rhynggellog a rhyng-deyrnasoedd, yn Caenorhabditis elegans 17. Mae indole yn signal mewngellol eang mewn ecoleg microbaidd, gan reoli nifer o swyddogaethau sy'n effeithio ar ffisioleg microbaidd, ffurfio sborau, sefydlogrwydd plasmid, ymwrthedd i gyffuriau, ffurfio bioffilm, a firwlens 18, 19. Nid yw gweithgaredd indole a'i ddeilliadau yn erbyn nematodau pathogenig eraill wedi'i astudio. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i weithgaredd nematicidal 34 indole yn erbyn nematodau pinwydd ac egluro mecanwaith gweithredu'r 5-ïodoindole mwyaf grymus gan ddefnyddio microsgopeg, ffotograffiaeth amser-dreigl, ac arbrofion docio moleciwlaidd, ac asesu ei effeithiau gwenwynig ar blanhigion gan ddefnyddio assay egino hadau.
Adroddwyd yn flaenorol bod crynodiadau uchel (>1.0 mM) o indole yn cael effaith nematoididol ar nematodau17. Yn dilyn triniaeth B. xylophilus (cyfnodau bywyd cymysg) gydag indole neu 33 o ddeilliadau indole gwahanol ar 1 mM, mesurwyd marwolaethau B. xylophilus trwy gyfrif nematodau byw a marw yn y grwpiau rheoli a'r grwpiau a gafodd eu trin. Dangosodd pump indole weithgaredd nematoididol sylweddol; roedd goroesiad y grŵp rheoli heb ei drin yn 95 ± 7% ar ôl 24 awr. O'r 34 indole a brofwyd, achosodd 5-iodoindole a 4-fluoroindole ar 1 mM farwolaeth o 100%, tra bod 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, a 7-iodoindole wedi achosi tua 50% o farwolaethau (Tabl 1).
Effaith 5-ïodoindol ar ffurfio gwagleoedd a metaboledd nematod coed pinwydd. (A) Effaith avermectin a 5-ïodoindol ar nematodau gwrywaidd oedolion, (B) wyau nematod cam L1 a (C) metaboledd B. xylophilus, (i) ni welwyd gwagleoedd ar 0 awr, arweiniodd y driniaeth at (ii) gwagleoedd, (iii) cronni gwagleoedd lluosog, (iv) chwyddo gwagleoedd, (v) uno gwagleoedd a (vi) ffurfio gwagleoedd enfawr. Mae saethau coch yn dynodi chwydd gwagleoedd, saethau glas yn dynodi uno gwagleoedd a saethau du yn dynodi gwagleoedd enfawr. Bar graddfa = 50 μm.
Yn ogystal, disgrifiodd yr astudiaeth hon hefyd y broses ddilyniannol o farwolaeth a achosir gan fethan mewn nematodau pinwydd (Ffigur 4C). Mae marwolaeth methanogenig yn fath anapoptotig o farwolaeth celloedd sy'n gysylltiedig â chronni gwactod cytoplasmig amlwg27. Ymddengys bod y diffygion morffolegol a welwyd mewn nematodau pinwydd yn gysylltiedig yn agos â mecanwaith marwolaeth a achosir gan fethan. Dangosodd archwiliad microsgopig ar wahanol adegau fod gwactod enfawr wedi'u ffurfio ar ôl 20 awr o amlygiad i 5-ïodoindol (0.1 mM). Gwelwyd gwactod microsgopig ar ôl 8 awr o driniaeth, a chynyddodd eu nifer ar ôl 12 awr. Gwelwyd sawl gwactod mawr ar ôl 14 awr. Roedd sawl gwactod wedi'u hasio yn weladwy'n glir ar ôl 12–16 awr o driniaeth, gan ddangos mai ymasiad gwactod yw sail y mecanwaith marwolaeth methanogenig. Ar ôl 20 awr, canfuwyd sawl gwactod enfawr ledled y mwydyn. Mae'r arsylwadau hyn yn cynrychioli'r adroddiad cyntaf o fetwsosis yn C. elegans.
Mewn mwydod a gafodd eu trin â 5-ïodoindol, gwelwyd crynhoi a rhwygo gwagleoedd hefyd (Ffig. 5), fel y dangosir gan blygu'r mwydod a rhyddhau gwagleoedd i'r amgylchedd. Gwelwyd aflonyddwch gwagleoedd hefyd ym mhilen plisgyn yr wy, sydd fel arfer yn cael ei chadw'n gyfan gan L2 yn ystod deor (Ffig. Atodol S2). Mae'r arsylwadau hyn yn cefnogi cyfranogiad cronni hylif a methiant osmoreoleiddio, yn ogystal ag anaf celloedd gwrthdroadwy (RCI), yn y broses o ffurfio a chwyddo gwagleoedd (Ffig. 5).
Gan ragdybio rôl ïodin yn y ffurfiant gwagle a welwyd, fe wnaethom ymchwilio i weithgaredd nematicidal sodiwm ïodid (NaI) ac ïodid potasiwm (KI). Fodd bynnag, ar grynodiadau (0.1, 0.5 neu 1 mM), ni wnaethant effeithio ar oroesiad nematodau na ffurfio gwagleoedd (Ffig. Atodol S5), er bod gan 1 mM KI effaith nematicidal bach. Ar y llaw arall, fe wnaeth 7-ïodoindol (1 neu 2 mM), fel 5-ïodoindol, achosi gwagleoedd lluosog ac anffurfiadau strwythurol (Ffig. Atodol S6). Dangosodd y ddau ïodoindol nodweddion ffenoteipig tebyg mewn nematodau pinwydd, tra nad oedd NaI a KI. Yn ddiddorol, ni wnaeth indol achosi ffurfio gwagleoedd yn B. xylophilus yn y crynodiadau a brofwyd (data heb ei ddangos). Felly, cadarnhaodd y canlyniadau mai'r cymhlyg indol-ïodin sy'n gyfrifol am wacwleiddio a metaboledd B. xylophilus.
Ymhlith yr indolau a brofwyd am weithgaredd nematicidal, 5-iodoindole oedd â'r mynegai llithro uchaf o -5.89 kcal/mol, ac yna 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), ac indole (-4.03) (Ffigur 6). Mae'r bond hydrogen asgwrn cefn cryf o 5-iodoindole i leucine 218 yn sefydlogi ei rwymo, tra bod pob deilliad indole arall yn rhwymo i serine 260 trwy fondiau hydrogen cadwyn ochr. Ymhlith ïodoindolau eraill a fodelwyd, mae gan 2-ïodoindol werth rhwymo o -5.248 kcal/mol, sydd oherwydd ei brif fond hydrogen â leucine 218. Mae rhwymiadau hysbys eraill yn cynnwys 3-ïodoindol (-4.3 kcal/mol), 4-ïodoindol (-4.0 kcal/mol), a 6-fflworindol (-2.6 kcal/mol) (Ffigur Atodol S8). Mae'r rhan fwyaf o indolau halogenedig ac indol ei hun, ac eithrio 5-iodoindole a 2-iodoindole, yn ffurfio bond gyda serine 260. Mae'r ffaith bod bondio hydrogen gyda leucine 218 yn dynodi rhwymo derbynnydd-ligand effeithlon, fel y gwelwyd ar gyfer ivermectin (Ffig. Atodol S7), yn cadarnhau bod 5-iodoindole a 2-iodoindole, fel ivermectin, yn rhwymo'n dynn i safle gweithredol y derbynnydd GluCL trwy leucine 218 (Ffig. 6 a Ffig. Atodol S8). Rydym yn cynnig bod angen y rhwymo hwn i gynnal strwythur mandwll agored y cymhlyg GluCL a thrwy rwymo'n dynn i safle gweithredol y derbynnydd GluCL, mae 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ac ivermectin felly'n cynnal y sianel ïon ar agor ac yn caniatáu amsugno hylif.
Docio moleciwlaidd indol ac indol halogenedig i GluCL. Cyfeiriadau rhwymo ligandau (A) indol, (B) 4-fflworindol, (C) 7-ïodoindol, a (D) 5-ïodoindol i safle gweithredol GluCL. Cynrychiolir y protein gan ruban, a dangosir y bondiau hydrogen asgwrn cefn fel llinellau dotiog melyn. Mae (A′), (B′), (C′), a (D′) yn dangos rhyngweithiadau'r ligandau cyfatebol â'r gweddillion asid amino cyfagos, a nodir y bondiau hydrogen cadwyn ochr gan saethau dotiog pinc.
Cynhaliwyd arbrofion i werthuso effaith wenwynig 5-iodoindole ar egino hadau bresych a radish. Ychydig iawn o effaith, os o gwbl, oedd gan 5-iodoindole (0.05 neu 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/mL) ar egino cychwynnol ac ymddangosiad planhigion bach (Ffigur 7). Yn ogystal, ni chanfuwyd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng cyfradd egino rheolyddion heb eu trin a hadau a gafodd eu trin â 5-iodoindole neu avermectin. Roedd yr effaith ar ymestyn y gwreiddiau tap a nifer y gwreiddiau ochrol a ffurfiwyd yn ddibwys, er bod 1 mM (10 gwaith ei grynodiad gweithredol) o 5-iodoindole wedi oedi datblygiad gwreiddiau ochrol ychydig. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos nad yw 5-iodoindole yn wenwynig i gelloedd planhigion ac nad yw'n ymyrryd â phrosesau datblygu planhigion yn y crynodiadau a astudiwyd.
Effaith 5-ïodoindol ar egino hadau. Egino, egino a gwreiddio ochrol hadau B. oleracea ac R. raphanistrum ar gyfrwng agar Murashige a Skoog gyda neu heb avermectin na 5-ïodoindol. Cofnodwyd egino ar ôl 3 diwrnod o ddeori ar 22°C.
Mae'r astudiaeth hon yn adrodd am sawl achos o ladd nematodau gan indolau. Yn bwysig, dyma'r adroddiad cyntaf o methyliad yn achosi gan ïodoindol (proses a achosir gan groniad gwagleoedd bach sy'n uno'n raddol i fod yn wagleoedd enfawr, gan arwain yn y pen draw at rwygo a marwolaeth y bilen) mewn nodwyddau pinwydd, gydag ïodoindol yn arddangos priodweddau nematicidal sylweddol tebyg i rai'r nematicid masnachol avermectin.
Adroddwyd yn flaenorol bod indolau yn cyflawni nifer o swyddogaethau signalau mewn procaryotau ac ewcaryotau, gan gynnwys atal/ffurfio biofilm, goroesiad bacteriol, a pathogenedd19,32,33,34. Yn ddiweddar, mae effeithiau therapiwtig posibl indolau halogenedig, alcaloidau indol, a deilliadau indol lled-synthetig wedi denu diddordeb ymchwil helaeth35,36,37. Er enghraifft, dangoswyd bod indolau halogenedig yn lladd celloedd Escherichia coli a Staphylococcus aureus parhaus37. Yn ogystal, mae o ddiddordeb gwyddonol astudio effeithiolrwydd indolau halogenedig yn erbyn rhywogaethau, genera a theyrnasoedd eraill, ac mae'r astudiaeth hon yn gam tuag at gyflawni'r nod hwn.
Yma, rydym yn cynnig mecanwaith ar gyfer marwolaethau a achosir gan 5-ïodoindol mewn C. elegans yn seiliedig ar anaf celloedd gwrthdroadwy (RCI) a methyliad (Ffigurau 4C a 5). Mae newidiadau edemataidd fel chwydd a dirywiad gwagwlaidd yn ddangosyddion o RCI a methyliad, a amlygir fel gwagwlau enfawr yn y cytoplasm48,49. Mae RCI yn ymyrryd â chynhyrchu ynni trwy leihau cynhyrchiad ATP, gan achosi methiant y pwmp ATPase, neu amharu ar bilenni celloedd ac achosi mewnlifiad cyflym o Na+, Ca2+, a dŵr50,51,52. Mae gwagwlau mewngytoplasmig yn codi mewn celloedd anifeiliaid o ganlyniad i gronni hylif yn y cytoplasm oherwydd mewnlifiad Ca2+ a dŵr53. Yn ddiddorol, mae'r mecanwaith hwn o ddifrod celloedd yn gildroadwy os yw'r difrod yn dros dro ac mae'r celloedd yn dechrau cynhyrchu ATP am gyfnod penodol o amser, ond os yw'r difrod yn parhau neu'n gwaethygu, mae'r celloedd yn marw.54 Mae ein harsylwadau'n dangos nad yw nematodau sy'n cael eu trin â 5-ïodoindol yn gallu adfer biosynthesis arferol ar ôl dod i gysylltiad ag amodau straen.
Gall y ffenoteip methyliad a achosir gan 5-iodoindole yn B. xylophilus fod oherwydd presenoldeb ïodin a'i ddosbarthiad moleciwlaidd, gan fod gan 7-iodoindole lai o effaith ataliol ar B. xylophilus na 5-iodoindole (Tabl 1 a Ffigur Atodol S6). Mae'r canlyniadau hyn yn rhannol gyson ag astudiaethau Maltese et al. (2014), a adroddodd fod trawsleoliad y rhan nitrogen pyridyl mewn indole o'r safle para- i'r meta-safle wedi dileu gwagioliad, ataliad twf, a gwenwyndra celloedd U251, gan awgrymu bod rhyngweithio'r moleciwl â safle gweithredol penodol yn y protein yn hanfodol27,44,45. Mae'r rhyngweithiadau rhwng indole neu indole halogenedig a derbynyddion GluCL a welwyd yn yr astudiaeth hon hefyd yn cefnogi'r syniad hwn, gan y canfuwyd bod 5- a 2-iodoindole yn rhwymo i dderbynyddion GluCL yn gryfach na'r indole eraill a archwiliwyd (Ffigur 6 a Ffigur Atodol S8). Canfuwyd bod yr ïodin yn yr ail neu bumed safle o'r indol yn rhwymo i leucine 218 y derbynnydd GluCL trwy fondiau hydrogen asgwrn cefn, tra bod indolau halogenedig eraill ac indole ei hun yn ffurfio bondiau hydrogen cadwyn ochr gwan gyda serine 260 (Ffigur 6). Felly, rydym yn dyfalu bod lleoliad yr halogen yn chwarae rhan bwysig yn y broses o ysgogi dirywiad gwagleolaidd, tra bod rhwymiad tynn 5-ïodoindole yn cadw'r sianel ïon ar agor, gan ganiatáu mewnlifiad hylif cyflym a rhwygiad gwagle. Fodd bynnag, mae mecanwaith gweithredu manwl 5-ïodoindole i'w bennu o hyd.
Cyn rhoi 5-ïodoindol ar waith yn ymarferol, dylid dadansoddi ei effaith wenwynig ar blanhigion. Dangosodd ein harbrofion egino hadau nad oedd gan 5-ïodoindol unrhyw effaith negyddol ar egino hadau na phrosesau datblygu dilynol yn y crynodiadau a astudiwyd (Ffigur 7). Felly, mae'r astudiaeth hon yn darparu sail ar gyfer defnyddio 5-ïodoindol yn yr amgylchedd ecolegol i reoli niweidioldeb nematodau pinwydd i goed pinwydd.
Mae adroddiadau blaenorol wedi dangos bod therapi sy'n seiliedig ar indole yn cynrychioli dull posibl o fynd i'r afael â phroblem ymwrthedd i wrthfiotigau a datblygiad canser55. Yn ogystal, mae gan indoles weithgareddau gwrthfacterol, gwrthganser, gwrthocsidiol, gwrthlidiol, gwrthdiabetig, gwrthfeirysol, gwrthymlediadol a gwrth-dwbercwlosis a gallant fod yn sail addawol ar gyfer datblygu cyffuriau56,57. Mae'r astudiaeth hon yn awgrymu am y tro cyntaf y defnydd posibl o ïodin fel asiant gwrthbarasitig ac anthelmintig.
Darganfuwyd avermectin dair degawd yn ôl ac enillodd Wobr Nobel yn 2015, ac mae ei ddefnydd fel gwrthlyngyr yn dal i fynd rhagddo. Fodd bynnag, oherwydd datblygiad cyflym ymwrthedd i avermectinau mewn nematodau a phlâu pryfed, mae angen strategaeth amgen, cost isel, ac sy'n gyfeillgar i'r amgylchedd i reoli haint PWN mewn coed pinwydd. Mae'r astudiaeth hon hefyd yn adrodd ar y mecanwaith y mae 5-iodoindole yn lladd nematodau pinwydd a bod gan 5-iodoindole wenwyndra isel i gelloedd planhigion, sy'n agor rhagolygon da ar gyfer ei gymhwysiad masnachol yn y dyfodol.
Cymeradwywyd yr holl arbrawf gan Bwyllgor Moeseg Prifysgol Yeungnam, Gyeongsan, Corea, a pherfformiwyd y dulliau yn unol â chanllawiau Pwyllgor Moeseg Prifysgol Yeungnam.
Perfformiwyd arbrofion deori wyau gan ddefnyddio gweithdrefnau sefydledig43. Er mwyn asesu cyfraddau deor (HR), trosglwyddwyd nematodau oedolion 1 diwrnod oed (tua 100 o fenywod a 100 o wrywod) i ddysglau Petri yn cynnwys y ffwng a'u gadael i dyfu am 24 awr. Yna ynyswyd yr wyau a'u trin â 5-iodoindole (0.05 mM a 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/ml) fel ataliad mewn dŵr distyll di-haint. Trosglwyddwyd yr ataliadau hyn (500 μl; tua 100 o wyau) i byllau plât diwylliant meinwe 24-byll a'u deori ar 22 °C. Gwnaed cyfrifiadau L2 ar ôl 24 awr o ddeori ond fe'u hystyriwyd yn farw os nad oedd y celloedd yn symud pan gafodd eu hysgogi â gwifren blatinwm mân. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, pob un â chwe ailadrodd. Cyfunwyd a chyflwynwyd y data o'r ddau arbrawf. Cyfrifir canran yr HR fel a ganlyn:
Aseswyd marwolaethau larfa gan ddefnyddio gweithdrefnau a ddatblygwyd yn flaenorol. Casglwyd wyau nematodau a chydamserwyd embryonau trwy ddeor mewn dŵr distyll di-haint i gynhyrchu larfa cam L2. Cafodd larfa cydamserol (tua 500 o nematodau) eu trin â 5-iodoindole (0.05 mM a 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/ml) a'u magu ar blatiau Petri B. cinerea. Ar ôl 48 awr o ddeori ar 22 °C, casglwyd nematodau mewn dŵr distyll di-haint ac archwiliwyd am bresenoldeb camau L2, L3, ac L4. Roedd presenoldeb camau L3 ac L4 yn dynodi trawsnewidiad larfa, tra bod presenoldeb cam L2 yn dynodi dim trawsnewidiad. Cafwyd delweddau gan ddefnyddio'r System Delweddu Celloedd Digidol iRiS™. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, pob un â chwe ailadroddiad. Cyfunwyd a chyflwynwyd y data o'r ddau arbrawf.
Aseswyd gwenwyndra 5-iodoindole ac avermectin i hadau gan ddefnyddio profion egino ar blatiau agar Murashige a Skoog.62 Cafodd hadau B. oleracea ac R. raphanistrum eu socian mewn dŵr distyll di-haint am un diwrnod yn gyntaf, eu golchi ag 1 ml o ethanol 100%, eu sterileiddio ag 1 ml o gannydd masnachol 50% (3% sodiwm hypoclorit) am 15 munud, a'u golchi bum gwaith ag 1 ml o ddŵr di-haint. Yna pwyswyd yr hadau wedi'u sterileiddio ar blatiau agar egino yn cynnwys 0.86 g/l (0.2X) cyfrwng Murashige a Skoog a 0.7% agar bacteriolegol gyda neu heb 5-iodoindole neu avermectin. Yna deorwyd y platiau ar 22 °C, a chymerwyd delweddau ar ôl 3 diwrnod o ddeori. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, pob un â chwe ailadrodd.
Amser postio: Chwefror-26-2025