Mae'r nematod pinwydd yn endoparasit mudol cwarantîn y gwyddys ei fod yn achosi colledion economaidd difrifol yn ecosystemau coedwigoedd pinwydd. Mae'r astudiaeth bresennol yn adolygu gweithgaredd nematicidal mewndolau halogenaidd yn erbyn nematodau pinwydd a'u mecanwaith gweithredu. Roedd gweithgareddau nematicidal 5-iodoindole ac avermectin (rheolaeth gadarnhaol) yn erbyn nematodau pinwydd yn debyg ac yn uchel ar grynodiadau isel (10 μg/mL). 5-iodoindole llai o ffrwythlondeb, gweithgaredd atgenhedlu, marwolaethau embryonig a larfal, ac ymddygiad locomotor. Mae rhyngweithiadau moleciwlaidd ligandau â derbynyddion sianel clorid glwtamad-gât glwtamad-benodol yn cefnogi'r syniad bod 5-iodoindole, fel avermectin, yn clymu'n dynn â safle gweithredol y derbynnydd. Fe wnaeth 5-Iodoindole hefyd achosi anffurfiadau ffenotypig amrywiol mewn nematodau, gan gynnwys cwymp / crebachu organau annormal a mwy o wactod. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gall gwagolau chwarae rhan mewn marwolaeth trwy gyfrwng methylation nematod. Yn bwysig, nid oedd 5-iodoindole yn wenwynig i rywogaethau planhigion (bresych a radish). Felly, mae'r astudiaeth hon yn dangos y gall defnyddio ïodoindole o dan amodau amgylcheddol reoli anaf gwywo pinwydd.
Mae nematodau pren pinwydd (Bursaphelenchus xylophilus) yn perthyn i'r nematodau coed pinwydd (PWN), nematodau endoparasitig mudol y gwyddys eu bod yn achosi difrod ecolegol difrifol i ecosystemau coedwigoedd pinwydd1. Mae clefyd gwywo pinwydd (PWD) a achosir gan y nematod coed pinwydd yn dod yn broblem ddifrifol ar sawl cyfandir, gan gynnwys Asia ac Ewrop, ac yng Ngogledd America, mae'r nematod yn dinistrio rhywogaethau pinwydd a gyflwynwyd1,2. Mae prinhad coed pinwydd yn broblem economaidd fawr, ac mae’r posibilrwydd y bydd yn lledaenu’n fyd-eang yn peri pryder3. Mae'r nematod yn ymosod yn fwyaf cyffredin ar y rhywogaethau pinwydd canlynol: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, a Pinus radiata4. Mae nematod pinwydd yn glefyd difrifol sy'n gallu lladd coed pinwydd o fewn wythnosau neu fisoedd i'r haint. Yn ogystal, mae achosion o nematodau pinwydd yn gyffredin mewn amrywiaeth o ecosystemau, felly mae cadwyni heintio parhaus wedi’u sefydlu1.
Mae Bursaphelenchus xylophilus yn nematod planhigion-parasitig cwarantîn sy'n perthyn i'r superfamily Aphelenchoidea a clade 102.5. Mae'r nematod yn bwydo ar ffyngau ac yn atgenhedlu ym meinweoedd pren coed pinwydd, gan ddatblygu'n bedwar cyfnod larfa gwahanol: L1, L2, L3, L4 ac oedolyn unigol1,6. O dan amodau o brinder bwyd, mae nematodau’r pinwydd yn mynd i gyfnod larfa arbenigol – dauer, sy’n parasiteiddio ei fector – y chwilen rhisgl pinwydd (Monochamus alternatus) ac yn cael ei drosglwyddo i goed pinwydd iach. Mewn lletywyr iach, mae nematodau'n mudo'n gyflym trwy feinweoedd planhigion ac yn bwydo ar gelloedd parenchymatous, sy'n arwain at nifer o adweithiau gorsensitifrwydd, gwywo pinwydd a marwolaeth o fewn blwyddyn ar ôl haint1,7,8.
Mae rheolaeth fiolegol ar nematodau pinwydd wedi bod yn her ers tro, gyda mesurau cwarantîn yn dyddio'n ôl i'r 20fed ganrif. Mae strategaethau cyfredol ar gyfer rheoli nematodau pinwydd yn ymwneud yn bennaf â thriniaethau cemegol, gan gynnwys mygdarthu pren a mewnblannu nematicides i foncyffion coed. Y nematicides a ddefnyddir amlaf yw avermectin ac avermectin bensoad, sy'n perthyn i'r teulu avermectin. Mae'r cemegau drud hyn yn hynod effeithiol yn erbyn llawer o rywogaethau nematodau ac fe'u hystyrir yn amgylcheddol ddiogel9. Fodd bynnag, disgwylir i ddefnydd dro ar ôl tro o'r nematicides hyn greu pwysau dethol a fydd bron yn sicr yn arwain at ymddangosiad nematodau pinwydd ymwrthol, fel y dangoswyd ar gyfer nifer o blâu pryfed, megis Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella a'r nematodau Trichostrongylus colubriformis ac Ostertagia circumcincta ymwrthedd, sydd wedi datblygu'n raddol ymwrthedd i averinau 1,1.1. Felly, mae angen astudio patrymau gwrthiant yn rheolaidd a sgrinio nematicides yn barhaus i ddod o hyd i fesurau amgen, cost-effeithiol ac ecogyfeillgar i reoli PVD. Yn ystod y degawdau diwethaf, mae nifer o awduron wedi cynnig defnyddio echdynion planhigion, olewau hanfodol ac anweddolion fel cyfryngau rheoli nematodau13,14,15,16.
Yn ddiweddar, dangoswyd gweithgaredd nematicidal indole, moleciwl signalau rhynggellog a rhyng-grefyddol, yn Caenorhabditis elegans 17 . Mae Indole yn signal mewngellol eang mewn ecoleg ficrobaidd, sy'n rheoli nifer o swyddogaethau sy'n effeithio ar ffisioleg ficrobaidd, ffurfio sborau, sefydlogrwydd plasmid, ymwrthedd i gyffuriau, ffurfio biofilm, a ffyrnigrwydd 18, 19 . Nid yw gweithgaredd indole a'i ddeilliadau yn erbyn nematodau pathogenig eraill wedi'u hastudio. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i weithgaredd nematicidal 34 mewndoles yn erbyn nematodau pinwydd ac egluro mecanwaith gweithredu'r 5-ïodoindole mwyaf grymus gan ddefnyddio microsgopeg, ffotograffiaeth treigl amser, ac arbrofion tocio moleciwlaidd, ac asesu ei effeithiau gwenwynig ar blanhigion gan ddefnyddio assay egino hadau.
Adroddwyd yn flaenorol bod crynodiadau uchel (>1.0 mM) o indole yn cael effaith nematicidal ar nematodau17. Yn dilyn trin B. xylophilus (cyfnodau bywyd cymysg) gyda indole neu 33 o ddeilliadau indole gwahanol ar 1 mM, mesurwyd marwolaethau B. xylophilus trwy gyfrif nematodau byw a marw yn y grwpiau rheoli a thrin. Dangosodd pum indoles weithgaredd nematicidal sylweddol; goroesiad y grŵp rheoli heb ei drin oedd 95 ± 7% ar ôl 24 h. O'r 34 indoles a brofwyd, achosodd 5-iodoindole a 4-fluoroindole ar 1 mM farwolaethau 100%, tra bod 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, a 7-iodoindole wedi achosi tua 50% o farwolaethau (Tabl 1).
Effaith 5-iodoindole ar ffurfiant gwactod a metaboledd nematod pren pinwydd. (A) Effaith avermectin a 5-iodoindole ar nematodau gwrywaidd sy'n oedolion, (B) wyau nematodau cam L1 a (C) metaboledd B. xylophilus, (i) ni arsylwyd gwagolau ar 0 h, arweiniodd triniaeth at (ii) gwagolau, (iii) cronni gwagolau lluosog, (iv) gwagolau lluosog, (iv) gwagolesau lluosog, (iv) gwactodolau lluosog, (iv) gwagolau gwagolau a (vi) ffurfio gwagolau anferth. Mae saethau coch yn dynodi bod gwactodau wedi chwyddo, mae saethau glas yn dynodi asio gwagolau ac mae saethau du yn dynodi gwagolau anferth. Bar graddfa = 50 μm.
Yn ogystal, disgrifiodd yr astudiaeth hon hefyd y broses ddilyniannol o farwolaethau a achosir gan fethan mewn nematodau pinwydd (Ffigur 4C). Mae marwolaeth methanogenig yn fath anapoptotig o farwolaeth celloedd sy'n gysylltiedig â chasgliad gwagolau sytoplasmig amlwg27. Mae'n ymddangos bod cysylltiad agos rhwng y diffygion morffolegol a welwyd mewn nematodau pinwydd a mecanwaith marwolaeth a achosir gan fethan. Dangosodd archwiliad microsgopig ar wahanol adegau fod gwagolau anferth wedi'u ffurfio ar ôl 20 h o ddod i gysylltiad â 5-iodoindole (0.1 mM). Arsylwyd gwagolau microsgopig ar ôl 8 awr o driniaeth, a chynyddodd eu nifer ar ôl 12 h. Arsylwyd sawl gwagolyn mawr ar ôl 14 h. Roedd sawl gwagolyn ymdoddedig i'w gweld yn glir ar ôl 12-16 h o driniaeth, sy'n dangos mai ymasiad gwactod yw sail y mecanwaith marwolaeth methanogenig. Ar ôl 20 awr, canfuwyd sawl gwagolyn anferth trwy'r llyngyr. Mae'r sylwadau hyn yn cynrychioli'r adroddiad cyntaf o fetiosis yn C. elegans.
Mewn mwydod 5-iodoindole-drin, arsylwyd agregu gwactod a rhwygo hefyd (Ffig. 5), fel y dangosir gan blygu llyngyr a rhyddhau gwactod i'r amgylchedd. Amhariad gwactod Gwelwyd hefyd yn y bilen plisgyn wyau, sydd fel arfer yn cael ei gadw yn gyfan gan L2 yn ystod deor (Atodol Ffig. S2). Mae'r arsylwadau hyn yn cefnogi ymglymiad hylif cronni a methiant osmoregulatory, yn ogystal ag anaf celloedd cildroadwy (RCI), yn y broses o ffurfio gwactod a suppuration (Ffig. 5).
Gan ddamcaniaethu rôl ïodin yn y ffurfiant gwactod a arsylwyd, gwnaethom ymchwilio i weithgaredd nematicidal sodiwm ïodid (NaI) a photasiwm ïodid (KI). Fodd bynnag, mewn crynodiadau (0.1, 0.5 neu 1 mM), nid oeddent yn effeithio ar oroesiad nematodau na ffurfio gwagolau (Ffig Atodol S5), er bod 1 mM KI wedi cael effaith nematicidal bach. Ar y llaw arall, 7-iodoindole (1 neu 2 mM), fel 5-iodoindole, ysgogwyd gwagolau lluosog ac anffurfiannau strwythurol (Atodol Ffig. S6). Dangosodd y ddau iodondoles nodweddion ffenotypig tebyg mewn nematodau pinwydd, ond nid oedd gan NaI a KI. Yn ddiddorol, ni wnaeth indole achosi ffurfio gwactod yn B. xylophilus yn y crynodiadau a brofwyd (data heb ei ddangos). Felly, cadarnhaodd y canlyniadau fod y cymhleth indole-ïodin yn gyfrifol am wagu a metaboledd B. xylophilus.
Ymhlith yr indolau a brofwyd am weithgaredd nematicidal, 5-iodoindole oedd â'r mynegai llithro uchaf o -5.89 kcal/mol, ac yna 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), ac indole (-4.03) (Ffigur 6). Mae'r bond hydrogen asgwrn cefn cryf o 5-iodoindole i leucine 218 yn sefydlogi ei rwymo, tra bod pob deilliad indole arall yn rhwymo i serine 260 trwy fondiau hydrogen cadwyn ochr. Ymhlith ïodoindolau eraill a fodelwyd, mae gan 2-ïodoindol werth rhwymo o -5.248 kcal/mol, sydd oherwydd ei brif fond hydrogen â leucine 218. Mae rhwymiadau hysbys eraill yn cynnwys 3-ïodoindol (-4.3 kcal/mol), 4-ïodoindol (-4.0 kcal/mol), a 6-fflworindol (-2.6 kcal/mol) (Ffigur Atodol S8). Mae'r rhan fwyaf o indolau halogenedig ac indol ei hun, ac eithrio 5-iodoindole a 2-iodoindole, yn ffurfio bond gyda serine 260. Mae'r ffaith bod bondio hydrogen gyda leucine 218 yn dynodi rhwymo derbynnydd-ligand effeithlon, fel y gwelwyd ar gyfer ivermectin (Ffig. Atodol S7), yn cadarnhau bod 5-iodoindole a 2-iodoindole, fel ivermectin, yn rhwymo'n dynn i safle gweithredol y derbynnydd GluCL trwy leucine 218 (Ffig. 6 a Ffig. Atodol S8). Rydym yn cynnig bod angen y rhwymo hwn i gynnal strwythur mandwll agored y cymhlyg GluCL a thrwy rwymo'n dynn i safle gweithredol y derbynnydd GluCL, mae 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ac ivermectin felly'n cynnal y sianel ïon ar agor ac yn caniatáu amsugno hylif.
Tocio moleciwlaidd indole a indole halogenaidd i GluCL. Cyfeiriadedd rhwymol (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, a (D) ligandau 5-iodoindole i safle gweithredol GluCL. Cynrychiolir y protein gan rhuban, a dangosir y bondiau hydrogen asgwrn cefn fel llinellau dotiog melyn. Mae (A′), (B′), (C′), a (D′) yn dangos rhyngweithiadau'r ligandau cyfatebol â'r gweddillion asid amino amgylchynol, ac mae'r bondiau hydrogen cadwyn ochr yn cael eu nodi gan saethau doredig pinc.
Cynhaliwyd arbrofion i werthuso effaith wenwynig 5-iodoindole ar egino hadau bresych a radish. Ychydig o effaith, os o gwbl, a gafodd 5-iodoindole (0.05 neu 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/mL) ar egino cychwynnol ac ymddangosiad planhigfa (Ffigur 7). Yn ogystal, ni chanfuwyd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng cyfradd egino rheolyddion heb eu trin a hadau a gafodd eu trin â 5-iodoindole neu avermectin. Roedd yr effaith ar elongation taproot a nifer y gwreiddiau ochrol a ffurfiwyd yn ddibwys, er bod 1 mM (10 gwaith ei grynodiad gweithredol) o 5-iodoindole wedi gohirio datblygiad gwreiddiau ochrol ychydig. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos nad yw 5-iodoindole yn wenwynig i gelloedd planhigion ac nad yw'n ymyrryd â phrosesau datblygu planhigion yn y crynodiadau a astudiwyd.
Effaith 5-iodoindole ar egino hadau. Eginiad, egino a gwreiddio ochrol hadau B. oleracea a R. raphanistrum ar gyfrwng Murashige a Skoog agar gyda neu heb avermectin neu 5-iodoindole. Cofnodwyd egino ar ôl 3 diwrnod o ddeor ar dymheredd o 22°C.
Mae'r astudiaeth hon yn adrodd am sawl achos o ladd nematodau gan indoles. Yn bwysig, dyma'r adroddiad cyntaf o ïodoindole sy'n achosi methylation (proses a achosir gan grynhoad gwagolyn bach sy'n uno'n raddol yn wagolau anferth, gan arwain yn y pen draw at rwygiad pilen a marwolaeth) mewn nodwyddau pinwydd, gydag iodoindole yn arddangos priodweddau nematicidal sylweddol tebyg i rai'r avermectin nematicide masnachol.
Adroddwyd yn flaenorol bod indoles yn cyflawni swyddogaethau signalau lluosog mewn procaryotes ac ewcaryotau, gan gynnwys ataliad / ffurfiant biofilm, goroesiad bacteriol, a phathogenedd19,32,33,34. Yn ddiweddar, mae effeithiau therapiwtig posibl mewndolau halogenaidd, alcaloidau indole, a deilliadau indole semisynthetig wedi denu diddordeb ymchwil helaeth35,36,37. Er enghraifft, dangoswyd bod mewndolau halogenaidd yn lladd celloedd Escherichia coli a Staphylococcus aureus parhaus37. Yn ogystal, mae o ddiddordeb gwyddonol i astudio effeithiolrwydd mewndolau halogenaidd yn erbyn rhywogaethau, genera a theyrnasoedd eraill, ac mae'r astudiaeth hon yn gam tuag at gyflawni'r nod hwn.
Yma, rydym yn cynnig mecanwaith ar gyfer marwoldeb a achosir gan 5-iodoindole mewn C. elegans yn seiliedig ar anaf celloedd cildroadwy (RCI) a methylation (Ffigurau 4C a 5). Mae newidiadau edematous megis puffiness a dirywiad gwagolaidd yn ddangosyddion RCI a methylation, a amlygir fel gwagolau anferth yn y cytoplasm48,49. Mae RCI yn ymyrryd â chynhyrchu ynni trwy leihau cynhyrchiant ATP, achosi methiant y pwmp ATPase, neu amharu ar gellbilenni ac achosi mewnlifiad cyflym o Na+, Ca2+, a dŵr50,51,52. Mae gwagolau mewnsytoplasmig yn codi mewn celloedd anifeiliaid o ganlyniad i hylif yn cronni yn y cytoplasm oherwydd mewnlifiad Ca2+ a dŵr53. Yn ddiddorol, mae'r mecanwaith hwn o ddifrod celloedd yn gildroadwy os yw'r difrod yn dros dro a bod y celloedd yn dechrau cynhyrchu ATP am gyfnod penodol o amser, ond os yw'r difrod yn parhau neu'n gwaethygu, mae'r celloedd yn marw.54 Dengys ein harsylwadau nad yw nematodau sy'n cael eu trin â 5-iodoindole yn gallu adfer biosynthesis arferol ar ôl dod i gysylltiad â chyflyrau straen.
Gall y ffenoteip methylation a achosir gan 5-iodoindole yn B. xylophilus fod oherwydd presenoldeb ïodin a'i ddosbarthiad moleciwlaidd, gan fod 7-iodoindole wedi cael llai o effaith ataliol ar B. xylophilus na 5-iodoindole (Tabl 1 a Ffigur Atodol S6). Mae'r canlyniadau hyn yn rhannol gyson ag astudiaethau Malteg et al. (2014). Mae'r rhyngweithiadau rhwng indoles indole neu halogenaidd a derbynyddion GluCL a welwyd yn yr astudiaeth hon hefyd yn cefnogi'r syniad hwn, oherwydd canfuwyd bod 5- a 2-iodoindole yn rhwymo derbynyddion GluCL yn gryfach na'r indoles eraill a archwiliwyd (Ffigur 6 a Ffigur Atodol S8). Canfuwyd bod yr ïodin yn ail neu bumed safle'r indole yn rhwymo i leucine 218 o'r derbynnydd GluCL trwy fondiau hydrogen asgwrn cefn, tra bod mewndolau halogenaidd eraill ac indole ei hun yn ffurfio bondiau hydrogen ochr-gadwyn gwan gyda serine 260 (Ffigur 6). Rydym felly'n dyfalu bod lleoleiddio'r halogen yn chwarae rhan bwysig wrth sefydlu dirywiad gwagol, tra bod rhwymiad tynn 5-iodoindole yn cadw'r sianel ïon ar agor, gan ganiatáu mewnlifiad hylif cyflym a gwactod rhwygo. Fodd bynnag, mae mecanwaith gweithredu manwl 5-iodoindole i'w benderfynu o hyd.
Cyn rhoi 5-ïodoindol ar waith yn ymarferol, dylid dadansoddi ei effaith wenwynig ar blanhigion. Dangosodd ein harbrofion egino hadau nad oedd gan 5-ïodoindol unrhyw effaith negyddol ar egino hadau na phrosesau datblygu dilynol yn y crynodiadau a astudiwyd (Ffigur 7). Felly, mae'r astudiaeth hon yn darparu sail ar gyfer defnyddio 5-ïodoindol yn yr amgylchedd ecolegol i reoli niweidioldeb nematodau pinwydd i goed pinwydd.
Mae adroddiadau blaenorol wedi dangos bod therapi seiliedig ar indole yn cynrychioli dull posibl o fynd i'r afael â phroblem ymwrthedd i wrthfiotigau a dilyniant canser55. Yn ogystal, mae gan indoles weithgareddau gwrthfacterol, gwrthganser, gwrthocsidiol, gwrthlidiol, gwrth-diabetig, gwrthfeirysol, gwrth-ymledol a gwrth-twbercwlosis a gallant fod yn sail addawol ar gyfer datblygu cyffuriau56,57. Mae'r astudiaeth hon yn awgrymu am y tro cyntaf y defnydd posibl o ïodin fel cyfrwng gwrthbarasitig ac anthelmintig.
Darganfuwyd Avermectin dri degawd yn ôl ac enillodd y Wobr Nobel yn 2015, ac mae ei ddefnydd fel anthelmintig yn dal i fynd rhagddo. Fodd bynnag, oherwydd datblygiad cyflym ymwrthedd i avermectinau mewn nematodau a phlâu pryfed, mae angen strategaeth amgen, cost isel ac ecogyfeillgar i reoli heintiad PWN mewn coed pinwydd. Mae'r astudiaeth hon hefyd yn adrodd ar y mecanwaith y mae 5-iodoindole yn lladd nematodau pinwydd a bod gan 5-iodoindole wenwyndra isel i gelloedd planhigion, sy'n agor rhagolygon da ar gyfer ei gymhwyso'n fasnachol yn y dyfodol.
Cymeradwywyd pob arbrawf gan Bwyllgor Moeseg Prifysgol Yeungnam, Gyeongsan, Korea, a pherfformiwyd y dulliau yn unol â chanllawiau Pwyllgor Moeseg Prifysgol Yeungnam.
Perfformiwyd arbrofion deori wyau gan ddefnyddio gweithdrefnau sefydledig43. Er mwyn asesu cyfraddau deor (HR), trosglwyddwyd nematodau oedolion 1 diwrnod oed (tua 100 o fenywod a 100 o wrywod) i ddysglau Petri yn cynnwys y ffwng a'u gadael i dyfu am 24 awr. Yna ynyswyd yr wyau a'u trin â 5-iodoindole (0.05 mM a 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/ml) fel ataliad mewn dŵr distyll di-haint. Trosglwyddwyd yr ataliadau hyn (500 μl; tua 100 o wyau) i byllau plât diwylliant meinwe 24-byll a'u deori ar 22 °C. Gwnaed cyfrifiadau L2 ar ôl 24 awr o ddeori ond fe'u hystyriwyd yn farw os nad oedd y celloedd yn symud pan gafodd eu hysgogi â gwifren blatinwm mân. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, pob un â chwe ailadrodd. Cyfunwyd a chyflwynwyd y data o'r ddau arbrawf. Cyfrifir canran yr HR fel a ganlyn:
Aseswyd marwolaethau larfâu gan ddefnyddio gweithdrefnau a ddatblygwyd yn flaenorol. Casglwyd wyau nematod a chafodd embryonau eu cydamseru trwy ddeor mewn dŵr distyll di-haint i gynhyrchu larfa cam L2. Cafodd larfâu cydamserol (oddeutu 500 o nematodau) eu trin â 5-iodoindole (0.05 mM a 0.1 mM) neu avermectin (10 μg/ml) a'u magu ar blatiau B. cinerea Petri. Ar ôl 48 h o ddeor ar 22 ° C, casglwyd nematodau mewn dŵr distyll di-haint a'u harchwilio am bresenoldeb cyfnodau L2, L3, a L4. Roedd presenoldeb camau L3 a L4 yn dynodi trawsnewidiad larfal, tra bod presenoldeb cam L2 yn dangos dim trawsnewid. Cafwyd delweddau gan ddefnyddio System Delweddu Celloedd Digidol iRiS™. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, pob un â chwe ailadrodd. Cyfunwyd a chyflwynwyd y data o'r ddau arbrawf.
Aseswyd gwenwyndra 5-iodoindole ac avermectin i hadau gan ddefnyddio profion egino ar blatiau agar Murashige a Skoog.62 Cafodd hadau B. oleracea a R. raphanistrwm eu socian gyntaf mewn dŵr distyll di-haint am un diwrnod, wedi'u golchi â 1 ml 100% ethanol, wedi'i sterileiddio â sodiwm 1% cannydd (5 ml) cannydd masnachol 5% a golchi bum gwaith gyda 1 ml o ddŵr di-haint. Yna cafodd yr hadau wedi'u sterileiddio eu gwasgu ar blatiau agar egino yn cynnwys 0.86 g/l (0.2X) cyfrwng Murashige a Skoog a 0.7% agar bacteriolegol gyda neu heb 5-iodoindole neu avermectin. Yna deorwyd y platiau ar 22 °C, a chymerwyd delweddau ar ôl 3 diwrnod o ddeori. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn mewn dau gam, ac roedd gan bob un ohonynt chwe ailadrodd.
Amser postio: Chwefror-26-2025