Deunyddiau planhigion a pathogenau
Darparwyd poblogaeth mapio cysylltiad sorghum o'r enw'r boblogaeth drosi sorghum (SCP) gan Dr. Pat Brown ym Mhrifysgol Illinois (bellach yn UC Davis). Fe'i disgrifiwyd yn flaenorol ac mae'n gasgliad o linellau amrywiol wedi'u trosi i ansensitifrwydd i ffotogyfnod a maint llai i hwyluso twf a datblygiad y planhigion mewn amgylcheddau yn yr Unol Daleithiau. Defnyddiwyd 510 o linellau o'r boblogaeth hon yn yr astudiaeth hon er, oherwydd egino gwael a phroblemau rheoli ansawdd eraill, ni ddefnyddiwyd yr holl linellau wrth ddadansoddi'r tri nodwedd. Yn y pen draw, defnyddiwyd data o 345 o linellau ar gyfer dadansoddi'r ymateb chitin, 472 o linellau ar gyfer yr ymateb flg22, a 456 ar gyfer ymwrthedd i TLS.B. cookeiCafwyd y straen LSLP18 gan Dr. Burt Bluhm ym Mhrifysgol Arkansas.
Mesur ymateb MAMP
Defnyddiwyd dau MAMP gwahanol yn yr astudiaeth hon flg22, (catalog Genscript # RP19986), a chitin. Tyfwyd planhigion sorghum mewn mewnosodiadau a osodwyd ar fflatiau wedi'u llenwi â phridd (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) yn y tŷ gwydr. Dyfrhawyd y planhigion y diwrnod cyn casglu'r sampl i osgoi lleithder dail ychwanegol ar ddiwrnod y casglu.
Cafodd y llinellau eu rhoi ar hap ac, am resymau logistaidd, fe'u plannwyd mewn sypiau o 60 llinell. Ar gyfer pob llinell, plannwyd tair 'pot' gyda dau had fesul llinell. Plannwyd sypiau dilynol cyn gynted ag yr oedd y swp blaenorol wedi'i brosesu nes bod y boblogaeth gyfan wedi'i hasesu. Cynhaliwyd dau rediad arbrofol ar gyfer y ddau MAMP gyda genoteipiau wedi'u hail-roi ar hap ym mhob un o'r ddau rediad.
Cynhaliwyd asesiadau ROS fel y disgrifiwyd yn flaenorol. Yn gryno, ar gyfer pob llinell, plannwyd chwe had mewn 3 phot gwahanol. O'r eginblanhigion canlyniadol, dewiswyd tri yn seiliedig ar unffurfiaeth. Ni ddefnyddiwyd eginblanhigion a oedd yn edrych yn anarferol neu a oedd yn sylweddol dalach neu'n fyrrach na'r mwyafrif. Torrwyd pedwar disg dail o 3 mm mewn diamedr o ran ehangaf 4ydd ddeilen tair planhigyn sorghum 15 diwrnod oed gwahanol. Un ddisg fesul dail o ddau blanhigyn a dau ddisg o un planhigyn, gyda'r ail ddisg yn dod yn rheolydd dŵr (gweler isod). Arnofiwyd y disgiau'n unigol ar 50 µl o H20 mewn plât du 96-ffynnon, eu selio â sêl alwminiwm i osgoi dod i gysylltiad â golau, a'u cadw ar dymheredd ystafell dros nos. Y bore wedyn gwnaed hydoddiant adwaith gan ddefnyddio chwiliedydd cemiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, rhif catalog 120-04891), perocsidase marchruddygl 2 mg/ml (Math VI-A, Sigma-Aldrich, rhif catalog P6782), a 100 mg/ml Chitin neu 2 μM o Flg22. Ychwanegwyd 50 µl o'r hydoddiant adwaith hwn at dri o'r pedwar ffynnon. Roedd y bedwaredd ffynnon yn rheolydd ffug, ac ychwanegwyd yr hydoddiant adwaith heb gynnwys y MAMP ato. Cynhwyswyd pedwar ffynnon wag yn cynnwys dŵr yn unig ym mhob plât hefyd.
Ar ôl ychwanegu'r toddiant adwaith, mesurwyd y goleuedd gan ddefnyddio darllenydd microplat aml-ganfod SynergyTM 2 (BioTek) bob 2 funud am 1 awr. Mae'r darllenydd plât yn cymryd mesuriadau goleuedd bob 2 funud yn ystod yr 1 awr hon. Cyfrifwyd swm yr holl 31 darlleniad i roi'r gwerth ar gyfer pob ffynnon. Cyfrifwyd y gwerth amcangyfrifedig ar gyfer yr ymateb MAMP ar gyfer pob genoteip fel (gwerth cyfartalog goleuedd y tair ffynnon arbrofol—gwerth y ffynnon ffug) -minws gwerth cyfartalog y ffynnon wag. Roedd gwerthoedd y ffynnon wag yn gyson yn agos at sero.
Disgiau dail oNicotiana benthamiana, cynhwyswyd un llinell sorghum ymatebol iawn (SC0003), ac un llinell sorghum ymatebol isel (PI 6069) hefyd fel rheolyddion ym mhob plât 96-ffynnon at ddibenion rheoli ansawdd.
B. cookeiparatoi inocwlwm a brechu
B. cookeiParatowyd yr inocwlwm fel y disgrifiwyd yn flaenorol. Yn gryno, cafodd grawn sorghum eu socian mewn dŵr am dri diwrnod, eu rinsio, eu rhoi mewn fflasgiau conigol 1L a'u rhoi mewn awtoclafio am awr ar 15psi a 121 °C. Yna cafodd y grawn eu brechu â thua 5 ml o mycelia wedi'i fwydo o ddiwylliant ffres oB. cookeiYnysiadau LSLP18 a'u gadael am 2 wythnos ar dymheredd ystafell, gan ysgwyd y fflasgiau bob 3 diwrnod. Ar ôl 2 wythnos, sychwyd y grawn sorghum a oedd wedi'u heintio â ffwng yn yr awyr ac yna'u storio ar 4 °C tan frechu yn y maes. Defnyddiwyd yr un brechlyn ar gyfer yr holl dreial a'i wneud yn ffres bob blwyddyn. Ar gyfer brechu, gosodwyd 6-10 o rawn heintiedig mewn troell o blanhigion sorghum 4-5 wythnos oed. Cychwynnodd y sborau a gynhyrchwyd o'r ffyngau hyn haint yn y planhigion sorghum ifanc o fewn wythnos.
Paratoi hadau
Cyn plannu yn y cae, cafodd hadau sorgwm eu trin â chymysgedd o ffwngladdiad, pryfleiddiad, a diogelwr yn cynnwys ~ 1% o ffwngladdiad Spirato 480 FS, 4% o ffwngladdiad Sebring 480 FS, a 3% o ddiogelwr hadau Sorpro 940 ES. Yna, sychwyd yr hadau yn yr awyr am 3 diwrnod a ddarparodd haen denau o'r cymysgedd hwn o amgylch yr hadau. Roedd y diogelwr yn caniatáu defnyddio'r chwynladdwr Dual Magnum fel triniaeth cyn-ymddangosiad.
Gwerthusiad o wrthwynebiad i fannau deilen targed
Plannwyd y SCP yng Ngorsaf Ymchwil Cnydau Canolog yn Clayton, NC ar Fehefin 14–15 2017 a Mehefin 20, 2018 mewn dyluniad bloc cyflawn ar hap gyda dau atgynhyrchiad arbrofol ym mhob achos. Plannwyd arbrofion mewn rhesi sengl 1.8 m gyda lled rhes o 0.9 m gan ddefnyddio 10 had fesul plot. Plannwyd dwy res ffin o amgylch cyrion pob arbrawf i atal effeithiau ymyl. Brechwyd yr arbrofion ar Orffennaf 20, 2017 a Gorffennaf 20, 2018 ac ar yr adeg honno roedd y planhigion sorghum yng nghyfnod twf 3. Cymerwyd sgoriau ar raddfeydd o un i naw, lle sgoriwyd planhigion nad oeddent yn dangos unrhyw arwyddion o glefyd fel naw a sgoriwyd planhigion cwbl farw fel un. Cymerwyd dau sgôr yn 2017 a phedair darlleniad yn 2018 gan ddechrau pythefnos ar ôl y brechiad bob blwyddyn. Cyfrifwyd sAUDPC (arwynebedd safonol o dan gromlin dilyniant clefyd) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.
Amser postio: Ebr-01-2021