Deunyddiau planhigion a phathogenau
Darparodd Dr. Pat Brown ym Mhrifysgol Illinois (yn awr yn UC Davis) gymdeithas fapio poblogaeth o'r enw poblogaeth trosi sorghum (SCP).Fe'i disgrifiwyd yn flaenorol ac mae'n gasgliad o linellau amrywiol wedi'u trosi i ffotogyfnod-ansensitifrwydd a statws llai i hwyluso twf a datblygiad y planhigion yn amgylcheddau UDA.Defnyddiwyd 510 o linellau o'r boblogaeth hon yn yr astudiaeth hon er, oherwydd egino gwael a materion rheoli ansawdd eraill, ni ddefnyddiwyd pob un o'r llinellau wrth ddadansoddi'r tair nodwedd.Yn y pen draw, defnyddiwyd data o 345 o linellau ar gyfer dadansoddi'r ymateb chitin, 472 llinell ar gyfer yr ymateb flg22, a 456 ar gyfer ymwrthedd TLS.B. cookeistraen Cafwyd LSLP18 gan Dr. Burt Bluhm ym Mhrifysgol Arkansas.
Mesur ymateb MAMP
Defnyddiwyd dau MAMP gwahanol yn yr astudiaeth hon flg22, (Genscript catalog # RP19986), a chitin .Tyfwyd planhigion sorghum mewn mewnosodiadau a osodwyd ar fflatiau wedi'u llenwi â phridd (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) yn y tŷ gwydr.Roedd planhigion yn cael eu dyfrio y diwrnod cyn casglu samplau i osgoi lleithder dail ychwanegol ar y diwrnod casglu.
Rhoddwyd y llinellau ar hap ac, am resymau logistaidd, fe'u plannwyd mewn sypiau o 60 llinell.Ar gyfer pob llinell, plannwyd tri 'phot' gyda dau hedyn fesul llinell.Plannwyd sypiau dilynol cyn gynted ag yr oedd y swp blaenorol wedi'i brosesu nes bod y boblogaeth gyfan wedi'i hasesu.Cynhaliwyd dau rediad arbrofol ar gyfer y ddau MAMP gyda genoteipiau wedi'u hail-hapam ym mhob un o'r ddau rediad.
Cynhaliwyd profion ROS fel y disgrifiwyd yn flaenorol.Yn gryno, ar gyfer pob llinell, plannwyd chwe hedyn mewn 3 pot gwahanol.O'r eginblanhigion canlyniadol, dewiswyd tri yn seiliedig ar unffurfiaeth.Ni ddefnyddiwyd eginblanhigion a oedd yn edrych yn anarferol neu a oedd yn sylweddol dalach neu'n fyrrach na'r mwyafrif.Cafodd pedair disg deilen â diamedr 3 mm eu tynnu allan o'r rhan ehangaf o'r 4edd ddeilen o dri phlanhigyn sorgwm 15 diwrnod oed gwahanol.Un ddisg fesul deilen o ddau blanhigyn a dwy ddisg o un planhigyn, gyda'r ail ddisg yn dod yn rheolydd dŵr (gweler isod).Cafodd y disgiau eu arnofio'n unigol ar 50 µl H20 mewn plât du 96-ffynnon, wedi'i selio â sêl alwminiwm i osgoi dod i gysylltiad â golau, a'i gadw ar dymheredd ystafell dros nos.Y bore wedyn gwnaed hydoddiant adwaith gan ddefnyddio chwiliwr cemiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, catalog # 120-04891), peroxidase rhuddygl poeth 2 mg/ml (Math VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), a 100 mg/ml Chitin neu 2 μM o Flg22.Ychwanegwyd 50 µl o'r hydoddiant adwaith hwn at dair o'r pedair ffynnon.Roedd y bedwaredd ffynnon yn ddull rheoli ffug, ac ychwanegwyd yr ateb adwaith heb gynnwys y MAMP ato.Roedd pedair ffynnon wag yn cynnwys dŵr yn unig hefyd wedi'u cynnwys ym mhob plât.
Ar ôl ychwanegu'r ateb adwaith, mesurwyd y goleuedd gan ddefnyddio darllenydd microplate aml-ganfod SynergyTM 2 (BioTek) bob 2 funud am 1 awr.Mae'r darllenydd plât yn cymryd mesuriadau goleuedd bob 2 funud yn ystod yr 1 awr hwn.Cyfrifwyd cyfanswm y 31 darlleniad i roi gwerth pob ffynnon.Cyfrifwyd y gwerth amcangyfrifedig ar gyfer ymateb MAMP ar gyfer pob genoteip fel (gwerth goleuedd cyfartalog y tair ffynnon arbrofol - y gwerth ffynnon ffug) - llai gwerth ffynnon gwag cyfartalog.Roedd gwerthoedd gwag y ffynnon yn gyson agos at sero.
Disgiau dail oNicotiana benthamiana, roedd un llinell sorghum ymatebol uchel (SC0003), ac un llinell sorghum ymatebol isel (DP 6069) hefyd wedi'u cynnwys fel rheolyddion ym mhob plât 96-ffynnon at ddibenion rheoli ansawdd.
B. cookeiparatoi inocwlwm a brechu
B. cookeiparatowyd inoculum fel y disgrifiwyd yn flaenorol.Yn gryno, cafodd grawn sorghum eu socian mewn dŵr am dri diwrnod, eu rinsio, eu sgwpio i fflasgiau conigol 1L a'u hawtoclafio am awr ar 15psi a 121 °C.Yna cafodd y grawn eu brechu â thua 5 ml o mycelia macerated o ddiwylliant ffres oB. cookeiMae LSLP18 yn ynysu a'i adael am bythefnos ar dymheredd ystafell, gan ysgwyd y fflasgiau bob 3 diwrnod.Ar ôl pythefnos, cafodd y grawn sorghum heigiedig o'r ffwng ei sychu yn yr aer ac yna ei storio ar 4 ° C nes bod y cae wedi'i frechu.Defnyddiwyd yr un inocwlwm ar gyfer y treial cyfan a'i wneud yn ffres bob blwyddyn.Ar gyfer brechu, gosodwyd 6-10 grawn heigiog yn y droellog o blanhigion sorghum 4-5 wythnos oed.Roedd y sborau a gynhyrchwyd o'r ffyngau hyn yn achosi haint yn y planhigion sorgwm ifanc o fewn wythnos.
Paratoi hadau
Cyn plannu yn y cae cafodd hadau sorghum ei drin â chymysgedd ffwngleiddiad, pryfleiddiad, a mwy diogel sy'n cynnwys ~ 1% ffwngleiddiad Spirato 480 FS, ffwngleiddiad Sebring 480 FS, 3% diogelwr hadau Sorpro 940 ES.Yna cafodd yr hadau eu sychu yn yr aer am 3 diwrnod a oedd yn darparu gorchudd tenau o'r cymysgedd hwn o amgylch yr hadau.Roedd y diogelwr yn caniatáu defnyddio'r chwynladdwr Magnum Deuol fel triniaeth cyn-ymddangosiad.
Gwerthusiad o ymwrthedd Spot Leaf Leaf
Plannwyd yr SCP yn yr Orsaf Ymchwil Cnydau Ganolog yn Clayton, NC ar 14-15 Mehefin 2017 a Mehefin 20, 2018 mewn dyluniad bloc cyflawn ar hap gyda dau atgynhyrchiad arbrofol ym mhob achos.Plannwyd arbrofion mewn rhesi sengl 1.8m gyda lled rhes o 0.9 m gan ddefnyddio 10 hadau fesul plot.Plannwyd dwy res ffin o amgylch ymylon pob arbrawf i atal effeithiau ymylol.Cafodd yr arbrofion eu brechu ar Orffennaf 20, 2017 a Gorffennaf 20, 2018 ac ar yr adeg honno roedd y planhigion sorghum ar gam twf 3. Cymerwyd graddfeydd ar raddfeydd un i naw , lle cafodd planhigion nad oedd yn dangos unrhyw arwyddion o glefyd sgôr o naw ac yn gyfan gwbl sgoriwyd planhigion marw fel un.Cymerwyd dwy sgôr yn 2017 a phedwar darlleniad yn 2018 gan ddechrau bythefnos ar ôl y brechiad bob blwyddyn.Cyfrifwyd sAUDPC (ardal safonedig o dan gromlin dilyniant afiechyd) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.
Amser post: Ebrill-01-2021